Film ini diangkat dari novel karya Frank Miller. Bercerita tentang pertempuran kuno Thermopylae di abad ke enam, di mana Raja Leonidas (Gerard Butler) dan 300 tentaranya, berjuang mati-matian melawan Xerxes dan tentara Persianya yang jumlahnya ribuan.

Suatu ketika utusan dari Raja Persia mendatangi Sparta untuk meminta kesedian Sparta untuk menyerah dan tunduk. Raja Sparta serta merta menolak tawaran itu dan menyatakan bahwa dia dan rakyatnya tidak akan menyerah begitu saja tanpa perlawanan. Namun sikap Raja Leonidas ini tidak sepenuhnya didukung oleh rakyatnya bahkan perwakilan para dewa-dewa nya.

Akhirnya Raja Leonidas memutuskan untuk menghadang pasukan Persia dengan 300 tentara Spartan pilihan. Ke 300 pasukan Spartan ini begitu tenang manghadapi musuh yang sangat banyak itu, hari demi hari mereka lewati dengan semangat juang mereka demi mempertahankan wilayah mereka.

Mampukah ke 300 Spartan ini membendung ribuan pasukan Persian tersebut ?